Лечение Заболеваний передающиxся половым путём
 

Лечение Заболеваний передающиxся половым путём
ЗАПИСЬ НА ПРИЕМУРОЛОГИЯГИНЕКОЛОГИЯСТОИМОСТЬ УСЛУГВОПРОС-ОТВЕТ
 
 
Бесплатная первичная консультация


Новости
 
Лечение Заболеваний передающиxся половым путём

ПЦР-диагностика или исследование методом ПЦР

 
Термин «ПЦР» происходит от словосочетания «полимеразная цепная реакция». Это метод молекулярной биологии, который позволяет создавать миллионы точных репликаций (копий) ДНК (нуклеиновой кислоты) из единственного биологического образца. Фактически, амплификация ДНК параллельно с ПЦР может позволить судмедэкспертам выполнять анализ ДНК настолько миниатюрных объектов, как, например, всего лишь нескольких клеток кожи. В отличие от некоторых других методов анализа ДНК, ПЦР-исследование имеет преимущество при рассмотрении чрезвычайно крошечных, и даже ослабленной интенсивности, образцов, однако, они не должны быть испорчены другой ДНК при коллектировании, хранении и транспортировке образца.

Помимо амплификации ДНК, метод ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, выделения новых генов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), как метод исследования, была изобретена в 1983 году американским биохимиком Кэри Муллисом. Его целью было создание метода, который бы позволил амплифицировать ДНК в ходе многократных последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы. Первая публикация по методу ПЦР появилась в ноябре 1985 года в журнале Science. Через 8 лет после этого за изобретение метода ПЦР Кэри Муллис получил Нобелевскую премию.

Базовые приготовления

Перед началом ПЦР ДНК должна быть выделена из образца. Выделение ДНК - это многоэтапный процесс, который можно выполнить вручную или с помощью такого инструмента, как инструмент COBAS® AmpliPrep, первого инструмента, который автоматически готовил образцы без вмешательства человека. После пробоподготовки начинается трехступенчатый процесс ПЦР.

1. Отделение целевой ДНК - денатурация

Во время первого этапа ПЦР, называемого денатурацией, пробирку с образцом ДНК нагревают до температуры более 90 градусов по Цельсию (194 градуса по Фаренгейту), что разделяет двухцепочечную ДНК на две отдельные нити. Высокая температура разрушает относительно слабые связи между нуклеотидами, которые образуют код ДНК.

2. Связывание праймеров с последовательностью ДНК

ПЦР не копирует всю ДНК в образце. Он копирует только очень специфическую последовательность генетического кода, на которую нацелены праймеры для ПЦР. Например, хламидиоз имеет уникальный паттерн нуклеотидов, специфичных для бактерий. ПЦР будет копировать только определенные последовательности ДНК, которые присутствуют в Chlamydia и отсутствуют у других видов бактерий. Для этого в ПЦР используются праймеры, искусственные олигонуклеотиды (короткие кусочки синтетической ДНК), которые связывают или отжигают только последовательности с обеих сторон области ДНК-мишени. На втором этапе используются два праймера - по одному для каждого из недавно разделенные одиночные цепи ДНК. Праймеры связываются с началом последовательности, которая будет скопирована, отмечая последовательность для третьего шага. Во время второго этапа трубка охлаждается, и связывание грунтовки происходит при температуре от 40 до 60 градусов Цельсия (104 - 140 градусов по Фаренгейту). На втором этапе получаются две отдельные цепи ДНК с последовательностями, помеченными праймерами. Две нити готовы к копированию.

3. Создание копии - расширение

На третьем этапе реакции, называемом расширением, температура увеличивается примерно до 72 градусов по Цельсию (161,5 градуса по Фаренгейту). Начиная с областей, помеченных праймерами, нуклеотиды в растворе добавляются к отожженным праймерам с помощью ДНК-полимеразы для создания новой цепи ДНК, комплементарной каждой из одиночных цепочек матрицы. После завершения расширения были сделаны две идентичные копии оригинальной ДНК.

После создания двух копий ДНК с помощью ПЦР цикл начинается снова, на этот раз с использованием новой дублированной ДНК. Каждый дубликат создает две новые копии, и после примерно 30 или 40 циклов ПЦР было сделано более одного миллиарда копий исходного сегмента ДНК. Поскольку процесс ПЦР автоматизирован, он может быть завершен всего за несколько часов. В медицинских учреждениях ПЦР делает достаточно копий целевой ДНК из клинического образца, чтобы провести анализ; Результаты этих диагностических и мониторинговых тестов предоставляют клиницистам и другим медицинским работникам информацию для руководства лечением.

Использование метода ПЦР при диагностике заболеваний

ПЦР дает возможность существенно ускорить и облегчить диагностику наследственных и вирусных заболеваний. Нужный ген амплифицируют с помощью ПЦР с использованием соответствующих праймеров, а затем секвенируют для определения мутаций. Вирусные инфекции можно обнаруживать сразу после заражения, за недели или месяцы до того, как проявятся симптомы заболевания. Такое раннее выявление вируса может дать врачам значительные возможности в лечении. Количество вируса («вирусная нагрузка») у пациента также может быть определено количественными методом анализа ДНК на основе ПЦР.

ПЦР позволяет провести раннюю диагностику злокачественных заболеваний, таких как лейкемия и лимфома, которая в настоящее время является высоко развитой в исследованиях рака и уже используется в плановом порядке. ПЦР может проводиться непосредственно на геномных образцах ДНК для выявления транслокационно-специфичных злокачественных клеток с чувствительностью, которая, по крайней мере, в 10 000 раз выше, чем у других методов. ПЦР позволяет также выявлять некультивируемые или медленно растущие микроорганизмы, таких как микобактерии, анаэробные бактерии, и вирусы из культуры ткани и моделей животных.

Использование метода ПЦР в персонализированной медицине

Иногда лекарства оказываются токсичными или аллергенными для некоторых пациентов. Причины этого — отчасти в индивидуальных различиях в восприимчивости и метаболизме лекарств и их производных. Эти различия детерминируются на генетическом уровне. Например, у одного пациента определенный цитохром (белок печени, отвечающий за метаболизм чужеродных веществ) может быть более активен, у другого — менее. Для того, чтобы определить, какой разновидностью цитохрома обладает данный пациент, предложено проводить ПЦР-анализ перед применением лекарства. Такой анализ называют предварительным генотипированием.

В нашем медицинском центре Вы можете сдать большое количество анализов, выполняемых методом ПЦР, по результатам которых Вы можете проконсультироваться с нашими специалистами и получить соответствующее, необходимое именно Вам, лечение.

на главную | карта сайта | назад